研究背景

子宫内膜癌是最常见的妇科肿瘤之一，相对其他妇科肿瘤来说预后较好，但复发性和化疗耐药患者依旧无法治愈。PARP抑制剂作为一种有应用前景的抗肿瘤药物，在卵巢癌治疗中疗效得到验证，对同源重组修复缺陷的肿瘤治疗效果更好。二甲双胍是一种治疗糖尿病药物，可有效辅助治疗多种疾病，包括子宫内膜癌。尼拉帕利单药或联合二甲双胍治疗子宫内膜癌的效果有待研究。

研究方法

研究使用Ishikawa和HEC-1B 细胞系评估尼拉帕利单药及尼拉帕利联合二甲双胍双药对细胞增殖、凋亡、侵袭和转移能力的影响。研究内容包括：1. IC50测定、transwell、划痕实验、Annexin V 凋亡实验和克隆增殖实验；2. Western blotting检测Bax, Caspase-3, Bcl-2, p-AKT, RAD51, γ-H2AX 等蛋白表达情况；3. CRISPR/Cas9技术评估PTEN基因敲除对尼拉帕利单药或尼拉帕利联合二甲双胍双药的抑瘤效果影响。

研究结果

01

IC50等测定结果（详见原文）

1）尼拉帕利对Ishikawa和HEC-1B的IC50分别是0.024 umol/L 和0.127 umol/L，癌细胞的侵袭和转移均被抑制。

2）Annexin V染色实验显示尼拉帕利单药可以显著增强细胞凋亡，联合二甲双胍会进一步增强细胞凋亡(P<0.01)。

3）采用“Multiple Drug Effect Analysis“方法评估尼拉帕利与二甲双胍是增效关系还是协同作用关系，结果显示二者是协同作用关系，CI<1.0。

02

CRISPR/Cas9结果

尼拉帕利和二甲双胍单药抑制PTEN敲除细胞系增殖能力更强，PTEN敲除不影响双药联合的协同作用 (PTEN野生型 vs. PTEN 突变型, CI=0.841 vs. CI=0.828)。

03

Western blotting结果

尼拉帕利和二甲双胍单药增加细胞凋亡相关蛋白表达，抑制细胞增值相关蛋白表达，但尼拉帕利增加同源重组修复相关蛋白RAD51蛋白的表达，而二甲双胍则能够抑制RAD51蛋白的表达量。PTEN敲除的子宫内膜癌细胞的RAD51蛋白表达相较野生型表达量更低。

研究结论

尼拉帕利通过抑制细胞活性、转移能力和诱导凋亡发挥抗肿瘤效果，联合二甲双胍可显著增强抑瘤能力。尼拉帕利和二甲双胍之间存在协同作用，可能的机制是二甲双胍可以抑制同源重组修复蛋白RAD51的表达。另外，PTEN基因突变增强2种药物单药抑瘤能力，且不影响两药联合的协同作用。该研究结果为开展尼拉帕利联合二甲双胍联合治疗子宫内膜癌临床研究提供临床前数据支撑。

研究者说

点评

子宫内膜癌的发生发展在某种程度上来说和卵巢癌相似，同时对临床样本的分子检测证实1/3子宫内膜癌中存在同源重组修复缺陷，基于此我们开展了本研究，并且在体外证实了尼拉帕利和二甲双胍对子宫内膜癌的抑制作用，该结果一定程度来说为临床治疗复发、耐药型子宫内膜癌提供了新的思路。目前我们团队正在进行相关动物实验，期望在动物实验中得到可喜的结果。

点评

本研究初步证实了尼拉帕利单药、二甲双胍单药能够抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭，促进凋亡，并且PTEN能够增加细胞对尼拉帕利和二甲双胍的药物敏感性。同时我们还证明了尼拉帕利和二甲双胍联合用药存在协同作用，在子宫内膜癌治疗中具有一定的应用潜力，为下一步的临床提供了一定的理论基础。